PCR və ya polimeraza zəncirvari reaksiya, DNT ardıcıllığını gücləndirmək üçün istifadə olunan bir texnikadır.İlk dəfə 1980-ci illərdə işinə görə 1993-cü ildə kimya üzrə Nobel mükafatına layiq görülmüş Kary Mullis tərəfindən hazırlanmışdır.PCR molekulyar biologiyada inqilab etdi, tədqiqatçılara kiçik nümunələrdən DNT-ni gücləndirməyə və onu ətraflı şəkildə öyrənməyə imkan verdi.
PCR, reaksiya qarışığının temperaturunu sürətlə dəyişdirə bilən bir maşın olan termal dövrədə baş verən üç addımlı bir prosesdir.Üç mərhələ denatürasiya, tavlama və uzatmadır.
Birinci mərhələdə, denaturasiya, iki zəncirli DNT iki zəncirlə birlikdə tutan hidrogen bağlarını qırmaq üçün yüksək temperatura (adətən təxminən 95°C) qızdırılır.Bu, iki tək zəncirli DNT molekulu ilə nəticələnir.
İkinci mərhələdə, tavlamada, primerlərin tək zəncirli DNT-də tamamlayıcı ardıcıllıqla bağlanmasına imkan vermək üçün temperatur təxminən 55°C-ə endirilir.Primerlər, hədəf DNT-də maraq ardıcıllığına uyğunlaşmaq üçün nəzərdə tutulmuş qısa DNT parçalarıdır.
Üçüncü addımda, genişləndirmədə, Taq polimeraza (bir növ DNT polimerazı) primerlərdən yeni DNT zəncirini sintez etməyə imkan vermək üçün temperatur təxminən 72°C-ə qaldırılır.Taq polimeraza isti bulaqlarda yaşayan və PCR-də istifadə olunan yüksək temperaturlara tab gətirə bilən bir bakteriyadan əldə edilir.
Bir PCR dövründən sonra nəticə hədəf DNT ardıcıllığının iki nüsxəsi olur.Bir sıra dövrlər üçün üç addımı təkrarlamaqla (adətən 30-40), hədəf DNT ardıcıllığının nüsxələrinin sayı eksponent olaraq artırıla bilər.Bu o deməkdir ki, hətta kiçik bir başlanğıc DNT də milyonlarla, hətta milyardlarla nüsxə yaratmaq üçün gücləndirilə bilər.
PCR tədqiqat və diaqnostikada çoxsaylı tətbiqlərə malikdir.Genetikada genlərin və mutasiyaların funksiyasını öyrənmək üçün, məhkəmə tibbdə DNT sübutlarını təhlil etmək üçün, yoluxucu xəstəliklərin diaqnostikasında patogenlərin mövcudluğunu aşkar etmək üçün və prenatal diaqnostikada döllərdə genetik pozğunluqları yoxlamaq üçün istifadə olunur.
PCR həmçinin DNT-nin miqdarını ölçməyə imkan verən kəmiyyət PCR (qPCR) və RNT ardıcıllığını gücləndirmək üçün istifadə edilə bilən əks transkripsiya PCR (RT-PCR) kimi bir sıra variasiyalarda istifadə üçün uyğunlaşdırılmışdır.
Bir çox tətbiqinə baxmayaraq, PCR-nin məhdudiyyətləri var.Bu, hədəf ardıcıllığı və müvafiq primerlərin dizaynı haqqında bilik tələb edir və reaksiya şərtləri düzgün optimallaşdırılmadıqda səhvə meylli ola bilər.Bununla belə, diqqətli eksperimental dizayn və icra ilə PCR molekulyar biologiyada ən güclü vasitələrdən biri olaraq qalır.
Göndərmə vaxtı: 22 fevral 2023-cü il